本研究针对低生物量环境样本中微生物DNA定量难题，通过优化芯片式数字PCR(dPCR) EvaGreen检测体系，系统评估了其与实时定量PCR(qPCR)在16S rRNA基因检测中的性能差异。研究团队采用合成DNA标准品验证发现，两种方法在30 copies·μl-1以上浓度时表现相当，但dPCR对乙醇和腐殖酸的抗干扰能力更强。

本研究针对16S rRNA扩增子测序在物种水平分析中的分辨率不足问题，开发了TaxaCal算法，通过两阶段机器学习校准策略（Genus-Level LSM和Species-Level KNN），显著缩小了16S与全基因组测序（WGS）的物种丰度差异。验证显示，仅需20对训练样本即可使校准后16S数据与WGS的Bray-Curtis距离降低15%，疾病检测AUC提升至 ...